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产品概述
product description
贝博® BBcellProbe® 葡萄糖摄取检测试剂盒（Glucose Uptake Assay Kit）是采用贝博开发的BBcellProbe® G61非代谢葡萄糖类似物荧光探针提供灵敏的非放射性分析，检测培养细胞中的葡萄糖摄取情况的试剂盒。 BBcellProbe® G61荧光葡萄糖类似物通过与葡萄糖相同的葡萄糖转运蛋白（GLUT）转运到细胞中，进入细胞后在C-6位置发生磷酸化，并很好地保留在细胞内，可以在单细胞水平上进行高时间和空间分辨率的原位检测。荧光葡萄糖类似物的摄取量反映细胞葡萄糖的摄取情况，
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.长期不用可以-80℃保存。避免反复冻融。
2.探针液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
三个月
检测方法
激光共聚焦/流式/荧光分光光度计/荧光酶标仪
适用样本
细胞
产品特点
1.使用方便：操作步骤简单；
2.安全：无需处理放射性物质。；
3.线性范围宽，可检测葡萄糖摄取的微小变化。
仪器准备
1.激光共聚焦/流式/荧光分光光度计/荧光酶标仪
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
1.不含葡萄糖的培养基
2.HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色透明底荧光专用96孔板
使用注意事项
1.预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。
2.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
3. G61染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
使用方法
试剂准备：
根据样本数量，用37℃预热的不含葡萄糖的培养基将G61探针500-1000倍稀释。充分混匀，配制成染色工作液，备用。
根据样本数量，用洗涤液B2将洗涤液B1进行20倍稀释，配制成洗涤液B，然后用冰浴的HBSS将洗涤液B进行50倍稀释。充分混匀，配制成洗涤液工作液，冰浴备用。
样本检测：
1. 将细胞接种到培养皿或孔板中，制备相应的待检测模型。
【注】：
以下以贴壁细胞原位检测为例，悬浮细胞按相应步骤操作即可。需流式检测时，用胰酶 消化收集细胞。
2. 培养好的待测细胞去除培养基，用预热的不含葡萄糖的培养基清洗 2-3 次。
3. 添加预热的不含葡萄糖的培养基，37℃、5% CO2 培养箱中培养 15-20 min。
4. 去除培养基，加入预热的染色工作液，37℃、5% CO2 培养箱中培养 15 min。
【注】：
染色工作液用量以相应的培养器皿的培养基量为准。例如24孔板一般用300 μl染色液。以有效覆盖细胞为准。
不同样本的最佳染色时间不同，需要根据预实验结果调整。一般在5-60分钟范围内调整染色时间。15分钟适用于很多常见样本。
必须使用37℃预热的染色工作液。
5. 去除染色液，用预冷的洗涤液工作液清洗2次。
【注】：
加入洗涤液后轻微晃动然后直接移除即可。
必须使用预冷的洗涤液工作液。
6. 去除洗涤液，添加预冷的洗涤液工作液，室温静置 5 min。
【注】：
此步骤必须静置5分钟，为第三次洗涤的必要步骤，有利于减少背景。
如果背景高，可以再洗涤第4次。
必须使用预冷的洗涤液工作液。
7. 去除洗涤液，添加预冷的洗涤液工作液，用共聚焦显微镜进行拍照分析。
常见问题分析
1.活细胞染色后，可以进行细胞固定的操作吗？？
由于固定操作时荧光探针会从细胞内漏出，染色后不能进行细胞固定。
2.用荧光酶标仪检测，对微孔板有什么特别要求吗？
需要使用荧光检测用的细胞培养板。
3.被细胞摄入后，会被分解或代谢掉吗？
实验过程中的操作不会造成分解。
4.无法观察到荧光信号变化，是什么原因？
可能时由于染色条件需要优化。预实验的时候可以先从稀释浓度（250倍~1000倍）、染色时间(5 min~1 h)范围内进行摸索。
5.荧光染料可以在细胞内停留多长时间？
一般在室温下可以保持在细胞内1 小时左右，不同的细胞种类，时间会有一定差别。
6.试剂盒可以定量吗？
不可以定量。本试剂盒是葡萄糖摄取能力强弱或增减的定性检测试剂盒。
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