葡萄糖摄取检测试剂盒(Glucose Uptake )-2NBDG 绿色荧光

BB-48514
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  • 200T
价格
  • ¥3180元
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产品概述 product description

贝博® BBcellProbe® 葡萄糖摄取检测试剂盒(Glucose Uptake Assay Kit)是采用2NBDG非代谢葡萄糖类似物荧光探针提供灵敏的非放射性分析,检测培养细胞中的葡萄糖摄取情况的试剂盒。
BBcellProbe® 2NBDG荧光葡萄糖类似物通过与葡萄糖相同的葡萄糖转运蛋白(GLUT)转运到细胞中,进入细胞后在C-6位置发生磷酸化,并很好地保留在细胞内,可以在单细胞水平上进行高时间和空间分辨率的原位检测。荧光葡萄糖类似物的摄取量反映细胞葡萄糖的摄取情况,荧光强度与葡萄糖类似物的摄取量成正比,在激发波长467 nm,发射波长538 nm附近,使用共聚焦显微镜、高分辨率/宽视场荧光显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光分光光度计等检测产物荧光强度,从而测定细胞中的葡萄糖摄取情况。
本试剂盒2NBDG荧光检测方法解决了放射性标记的葡萄糖类似物 3H-2DG使用不便利和比色法的检测信号窗口小线性范围窄的弊端,是目前使用便捷度和检测灵敏度较为均衡的结合。
葡萄糖是大多数细胞的主要能量来源。葡萄糖通过质膜的转运是葡萄糖代谢中的第一个限速步骤,在动物细胞中,这是由葡萄糖转运蛋白 GLUT家族和一些细胞内的己糖激酶完成的。葡萄糖摄取由转运蛋白的GLUT家族促进,其表达和活性受到多种机制的调节。葡萄糖摄取在许多癌症细胞中上调,这些细胞表现出高的有氧糖酵解率。出现胰岛素抵抗的细胞表现出对胰岛素刺激的葡萄糖摄取减少。需要注意的是,检测葡萄糖摄取与检测葡萄糖消耗是不同的。葡萄糖摄取发生在 10 分钟或更短的时间内,主要特异性检测转运蛋白的活性,而葡萄糖浓度的变化涉及多种途径,通常需要几个小时。
葡萄糖摄取的变化可以反映新陈代谢的整体变化,以及许多特定的代谢过程。在癌细胞研究中,检测葡萄糖摄取可以筛选葡萄糖转运蛋白抑制剂或者监测葡萄糖转运蛋白的过度表达。在脂肪和肌肉细胞中,可以通过检测葡萄糖摄取来观察胰岛素刺激后GLUT易位的变化。在T细胞巨噬细胞等免疫相关细胞中,检测葡萄糖摄取可用于追踪某些细胞类型从一个阶段转化到另一个阶段的变化。
BBcellProbe® G系列葡萄糖摄取探针具有多种颜色可以选择,可根据情况选择使用。除了本试剂盒的绿色荧光探针,贝博还可以提供红色和蓝色荧光的葡萄糖摄取检测试剂盒。
贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。
贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种细胞成像、细胞示踪与追踪试剂盒产品。包括各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。

保存温度
-20℃ 避光保存。
有效期
3个月
检测方法
激光共聚焦/流式/荧光分光光度计/荧光酶标仪
适用样本
细胞
产品特点
1.使用方便:操作步骤简单;
2.安全:无需处理放射性物质。;
3.线性范围宽,可检测葡萄糖摄取的微小变化。
产品应用
激光共聚焦/流式/荧光分光光度计/荧光酶标仪
仪器准备
1.激光共聚焦/流式/荧光分光光度计/荧光酶标仪
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
1.不含葡萄糖的培养基
2.HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光专用黑色96孔板
使用注意事项
1.预实验很重要。必须要做预实验,在正式实验之前取少量样本优化实验条件,并像正式样本一样认真进行,看实验结果是否可行,实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性,不同样本的实验条件通常差异较大,同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同,为了避免浪费正式样本和试剂,一定要提前预实验优化实验条件。
2.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
3. 2NBDG染色液为DMSO溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4. 使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
使用方法
根据样本数量,用37℃预热的不含葡萄糖的培养基将2NBDG探针500-1000倍稀释。充分混匀,配制成染色工作液,备用。


根据样本数量,用洗涤液B2将洗涤液B1进行20倍稀释,配制成洗涤液B,然后用冰浴的HBSS将洗涤液B进行50倍稀释。充分混匀,配制成洗涤液工作液,冰浴备用。


样本检测:
1. 将细胞接种到培养皿或孔板中,制备相应的待检测模型。
2. 待测细胞去除培养基,用预热的不含葡萄糖的培养基清洗 2-3 次。
3. 添加预热的不含葡萄糖的培养基,37℃、5% CO2 培养箱中培养 15-20 min。
4. 去除培养基,加入预热的染色工作液,37℃、5% CO2 培养箱中培养 15 min。
5. 去除染色液,用预冷的洗涤液工作液清洗2次。
6. 去除洗涤液,添加预冷的洗涤液工作液,室温静置 5 min。
7. 去除洗涤液,添加预冷的洗涤液工作液,用共聚焦显微镜进行拍照分析。
常见问题分析
1.活细胞染色后,可以进行细胞固定的操作吗??
由于固定操作时荧光探针会从细胞内漏出,染色后不能进行细胞固定。

2.用荧光酶标仪检测,对微孔板有什么特别要求吗?
需要使用荧光检测用的细胞培养板。

3.被细胞摄入后,会被分解或代谢掉吗?
实验过程中的操作不会造成分解。

4.无法观察到荧光信号变化,是什么原因?
可能时由于染色条件需要优化。预实验的时候可以先从稀释浓度(250倍~1000倍)、染色时间(5 min~1 h)范围内进行摸索。

5.荧光染料可以在细胞内停留多长时间?
一般在室温下可以保持在细胞内1 小时左右,不同的细胞种类,时间会有一定差别。

6.试剂盒可以定量吗?
不可以定量。本试剂盒是葡萄糖摄取能力强弱或增减的定性检测试剂盒。