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保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.微量试剂开盖前须离心！
2.开盖后组份按要求条件保存。
3.拆封后请尽快使用完！
2.开盖后组份按要求条件保存。
3.拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
荧光酶标仪/荧光分光光度计
适用样本
细胞裂/组织/纯化的重组酶
产品应用
1.纯化酶/细胞/组织裂解液酶活测定
2.抑制剂筛选
3.活细胞表面及分泌酶活性测定
4.酶动力学研究
2.抑制剂筛选
3.活细胞表面及分泌酶活性测定
4.酶动力学研究
仪器准备
1. 荧光酶标仪/荧光分光光度计
2. 离心机
3. 恒温水浴/气浴/金属浴设备
4. 移液器
5. 冰箱
2. 离心机
3. 恒温水浴/气浴/金属浴设备
4. 移液器
5. 冰箱
试剂准备
1. PBS缓冲液
2. 蛋白定量试剂盒
3. （选做）特异性抑制剂
2. 蛋白定量试剂盒
3. （选做）特异性抑制剂
耗材准备
1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套
4. 荧光检测专用的黑色96孔板（必备）
2. 吸头
3. 一次性手套
4. 荧光检测专用的黑色96孔板（必备）
使用注意事项
1.除了目标模型样本，须根据实验需要合理设置阳性对照、阴性对照、空白对照等样本。
2.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
3.底物为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.预实验需确定酶浓度和孵育时间的线性区间，避免底物过度消耗或信号饱和。
5.如果样品中蛋白含量低，加大样品量，裂解样品时需设法使样品中的蛋白量达到200-500 μg每样。
2.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
3.底物为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.预实验需确定酶浓度和孵育时间的线性区间，避免底物过度消耗或信号饱和。
5.如果样品中蛋白含量低，加大样品量，裂解样品时需设法使样品中的蛋白量达到200-500 μg每样。
使用方法
电子版仅供参考，最终以试剂盒的纸质说明书为准！
样品处理
液体样品：
直接测定。
细胞样品：
1. 收集细胞，在4℃，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 在细胞中加入冷的裂解缓冲液A，高速涡旋振荡15秒。
4. 置冰上持续振荡20-45分钟。
5. 在4℃，12,000×g条件下离心15分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，用 BCA 法测定蛋白浓度。
7. 置于冰上立即检测或者-80℃冰箱保存备用。
组织样品：
1. 取适量组织样本剪碎，预冷的 PBS 冲洗去除残留血液，无菌滤纸吸干表面液体，快速称重后剪碎。
2. 按照每50 mg/100 μl冷的裂解缓冲液A，用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见组织块。
3. 冰上振荡20-45分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
4. 在4℃，12,000×g条件下离心5分钟。
5. 将中层上清液吸入另一预冷的干净离心管。
6. 用 BCA 法测定蛋白浓度。
7. 置于冰上立即检测或-80℃冰箱保存备用。
蛋白定量
对上述处理过的上清进行蛋白定量。
aSMase活性检测
酶活性计算
酸性鞘磷脂酶 活性可表示为每百万细胞的相对荧光单位（RFU）、样品中每微克蛋白质的相对荧光单位（RFU），或处理组样品相对于未处理对照组或阴性对照样品的 RFU 倍数增加。
样品处理
液体样品：
直接测定。
细胞样品：
1. 收集细胞，在4℃，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 在细胞中加入冷的裂解缓冲液A，高速涡旋振荡15秒。
4. 置冰上持续振荡20-45分钟。
5. 在4℃，12,000×g条件下离心15分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，用 BCA 法测定蛋白浓度。
7. 置于冰上立即检测或者-80℃冰箱保存备用。
组织样品：
1. 取适量组织样本剪碎，预冷的 PBS 冲洗去除残留血液，无菌滤纸吸干表面液体，快速称重后剪碎。
2. 按照每50 mg/100 μl冷的裂解缓冲液A，用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见组织块。
3. 冰上振荡20-45分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
4. 在4℃，12,000×g条件下离心5分钟。
5. 将中层上清液吸入另一预冷的干净离心管。
6. 用 BCA 法测定蛋白浓度。
7. 置于冰上立即检测或-80℃冰箱保存备用。
蛋白定量
对上述处理过的上清进行蛋白定量。
aSMase活性检测
酶活性计算
酸性鞘磷脂酶 活性可表示为每百万细胞的相对荧光单位（RFU）、样品中每微克蛋白质的相对荧光单位（RFU），或处理组样品相对于未处理对照组或阴性对照样品的 RFU 倍数增加。
常见问题分析
荧光强度值偏低？
1. 样品上样量不够：
2. 样本不新鲜：
3. 样品裂解不够充分。
1. 样品上样量不够：
2. 样本不新鲜：
3. 样品裂解不够充分。
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