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产品概述
product description
贝博® BBproExtra® 突触体提取试剂盒可用于各种动物的突触体提取。提取的突触体具有生物活性，可以用于突触体功能研究、染色、蛋白提取等各种下游应用。
试剂盒通过提取液释放突触体后，再通过差速离心和密度梯度离心纯化分离突触体结构，同时保持细胞器膜结构和蛋白活性。
本试剂盒提取的突触体回收率高，膜蛋白活性保持完整，可以用于各种细胞器功能研究、蛋白提取等下游应用。
突触体（Synaptosome）是神经元突触部位在匀浆和离心过程中形成的封闭囊泡结构，包含完整的突触前末梢、突触间隙和突触后膜区域。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.试剂瓶开盖后各组份按要求条件保存。
2.试剂拆封后请尽快使用完！
2.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
适用样本
动物脑组织
仪器准备
1.高速冷冻离心机；
2.超速离心机；
3.振荡器；
4.Dounce匀浆器；
5.涡旋混匀器；
6.移液器；
7.冰箱；
8.冰盒
2.超速离心机；
3.振荡器；
4.Dounce匀浆器；
5.涡旋混匀器；
6.移液器；
7.冰箱；
8.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液
耗材准备
1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套
4. 超速离心管
5. 70/100 μm 细胞筛
2. 吸头
3. 一次性手套
4. 超速离心管
5. 70/100 μm 细胞筛
使用注意事项
1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3. 以下步骤以细胞为例，每样约 2×107个细胞。实际使用时可以等比例调整。
2. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3. 以下步骤以细胞为例，每样约 2×107个细胞。实际使用时可以等比例调整。
使用方法
1. 提取液准备：
每1 ml冷的提取液A中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 小鼠/大鼠颈椎脱臼处死，快速取200 mg新鲜大鼠大脑皮层组织（或海马），用预冷的PBS洗涤干净，去除血液和结缔组织。
3. 用手术剪刀或刀片尽可能剪碎，。
4. 每100 mg 组织中加入900 μL冷的提取液试剂 A混匀。转移至预冷的玻璃匀浆器中。
5. 用Dounce匀浆器匀浆。
6. 收集匀浆液，经70-100 μm 细胞筛过滤（如无细胞筛可省略此步）。
7. 在4℃，600×g条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
8. 将上清在4℃，1,000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
9. 将上清在4℃，12,000-20,000×g力条件下离心20-30分钟。弃上清，收集沉淀。
10. 在沉淀中加入1 mL 提取液B重悬沉淀，充分混匀备用。
11. 在超速离心管中依次加入 3 mL 提取液C3→3 mL 提取液C2→3 mL 提取液C1。
12. 将提取液B重悬的沉淀悬液缓慢铺在提取液C1的顶层。
13. 超速离心，在100,000×g条件，4℃离心 2 小时。
14. 离心后，提取液C3和C2界面层处的白色浑浊带为突触体富集层。
15. 用 21 G 针头从离心管侧壁靠近C3和C2界面层处条带处穿刺，缓慢吸出突触体组分，置于预冷离心管中。
16. 向收集的突触体组分中加入 2-3 倍体积的预冷提取液E，轻轻颠倒混匀。
17. 在16,000-20,000×g，4℃离心 20-30 分钟，弃上清，沉淀即为突触体。
每1 ml冷的提取液A中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 小鼠/大鼠颈椎脱臼处死，快速取200 mg新鲜大鼠大脑皮层组织（或海马），用预冷的PBS洗涤干净，去除血液和结缔组织。
3. 用手术剪刀或刀片尽可能剪碎，。
4. 每100 mg 组织中加入900 μL冷的提取液试剂 A混匀。转移至预冷的玻璃匀浆器中。
5. 用Dounce匀浆器匀浆。
6. 收集匀浆液，经70-100 μm 细胞筛过滤（如无细胞筛可省略此步）。
7. 在4℃，600×g条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
8. 将上清在4℃，1,000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
9. 将上清在4℃，12,000-20,000×g力条件下离心20-30分钟。弃上清，收集沉淀。
10. 在沉淀中加入1 mL 提取液B重悬沉淀，充分混匀备用。
11. 在超速离心管中依次加入 3 mL 提取液C3→3 mL 提取液C2→3 mL 提取液C1。
12. 将提取液B重悬的沉淀悬液缓慢铺在提取液C1的顶层。
13. 超速离心，在100,000×g条件，4℃离心 2 小时。
14. 离心后，提取液C3和C2界面层处的白色浑浊带为突触体富集层。
15. 用 21 G 针头从离心管侧壁靠近C3和C2界面层处条带处穿刺，缓慢吸出突触体组分，置于预冷离心管中。
16. 向收集的突触体组分中加入 2-3 倍体积的预冷提取液E，轻轻颠倒混匀。
17. 在16,000-20,000×g，4℃离心 20-30 分钟，弃上清，沉淀即为突触体。
常见问题分析
突触体如何鉴定？
可用用Western Blot 检测相关突触体的标志物，突触前：Synaptophysin、Synapsin I、VAMP；突触后：PSD-95、GluR1
透射电镜（TEM）：观察囊泡双分子层结构、可见突触前/后特化结构.
功能验证，神经递质释放等功能实验。
样品如何保存？
保存：短期（1 周）4℃冷藏；长期（数月）分装后 - 80℃冻存，避免反复冻融。
可用用Western Blot 检测相关突触体的标志物，突触前：Synaptophysin、Synapsin I、VAMP；突触后：PSD-95、GluR1
透射电镜（TEM）：观察囊泡双分子层结构、可见突触前/后特化结构.
功能验证，神经递质释放等功能实验。
样品如何保存？
保存：短期（1 周）4℃冷藏；长期（数月）分装后 - 80℃冻存，避免反复冻融。
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