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贝博® BBcellProbe® 线粒体膜电位检测试剂盒（TMRE）是利用TMRE探针检测线粒体膜电位的试剂盒，可以快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化，可以用于早期的细胞凋亡检测。 线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。TMRE是一种可以通透细胞膜的选择性染色活细胞线粒体的荧光染料，广泛用作检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)的荧光探针。TMRE是阳离子荧光染料，在正常细胞中能够依赖线粒体跨膜电位进入线粒体基质。在细胞凋亡发生时，线粒体膜完整性破坏，线粒体膜通透性转运孔开放，引起线粒体跨膜电位(ΔΨm) 的崩溃，TMRE重新释放出线粒体。通过荧光信号的强弱来检测线粒体膜电位的变化，可用于培养的细胞或从组织中提取出的线粒体的膜电位检测。 四甲基罗丹明乙基酯（TMRE）在线粒体中的积累被证明是由它们的膜电位驱动的。此外，由于它们的疏水特性降低，这些探针对细胞表现出与罗丹明6G相比低10-20倍的电位非依赖性结合。四甲基罗丹明乙酯为动态和最佳原位定量测量荧光染料之一，比罗丹明123更好 ，因为其被活细胞快速和可逆地吸收。 TMRE比罗丹明123更快地穿过质膜，并且它们的强荧光允许使用低探针浓度，从而避免聚集。由于它们的荧光对环境相对不敏感，因此TMRE的空间分辨荧光呈现其跨膜分布的无偏分布，TMRE已成功用于高分辨率对于影响活细胞中线粒体膜电位的药物的高通量筛选测定。 贝博® BBcellProbe® TMRE可以快速通过细胞膜，仅需几分钟就可以被具有活性的线粒体所俘获，并且对细胞没有毒性。TMRE的最大激发波长为549nm，最大发射波长为574nm。
2.开盖后组份按要求条件保存。
3.拆封后请尽快使用完！
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
2.贴壁细胞
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）
2.吸头
3.一次性手套
4.铝箔
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
3.始终保持平衡染液中pH值的一致性，因为pH值的变化将影响膜电位。
4.根椐细胞种类、实验条件不同流式细胞仪设置不同。
5.线粒体膜电位降低，荧光强度减弱。但是结果分析时注意排除荧光淬灭现象，TMRE荧光物质的激发光谱和发射光谱有一部分是重合的，其发射光有一部分（与激发光重合的部分）会被自己重新吸收，而且这种吸收的效益随着该荧光物质的浓度增加而增强。换而言之，当荧光物质浓度很高的时候其荧光强度和浓度的增加不成正比，此时注意检测结果的分析。采用JC-1法可以减少荧光淬灭的影响。
根据样本数量，用37℃培养箱预热染料稀释液试剂B将TMRE荧光染料10倍稀释。再用HBSS或相应的无血清培养基或其他缓冲液将探针TMRE进行40-200倍稀释，配制成染色工作液。
悬浮细胞
1. 收集样本细胞以及阴性、阳性对照细胞。
2. 用PBS洗涤细胞两次。离心收集细胞。
3. 用500 μl TMRE染色工作液将细胞重悬，细胞密度约5-10X105个/ml。37℃，5% CO2的培养箱中孵育15分钟。
4. 常温离心收集细胞。 用PBS洗涤细胞2次。
5. 用500 μl预热的PBS/HBSS缓冲液将细胞重悬。
6. 用流式细胞仪/荧光酶标仪/分光光度计检测分析结果，或者用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察结果。
贴壁细胞
对于贴壁细胞，可以先收集细胞，重悬后参考悬浮细胞的检测方法。也可以直接原位染色后检测。
纯化线粒体
1． 把配制好的TMRE 染色工作液再用TMRE稀释液稀释5 倍。
2． 0.9 mL 5倍稀释的TMRE染色工作液中加入0.1 mL 总蛋白量为10～100 ug的纯化的线粒体。
3． 结果检测。
组织样本
组织样本可以用玻璃匀浆器匀浆成单细胞悬液后按照细胞样本的方法检测。也可以用其他细胞悬液制备的试剂盒处理组织后检测。
结果分析 ：
检测时可以把激发光设置为549 nm，发射光设置为574 nm。
线粒体膜电位降低，荧光强度减弱。
用流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位的情况。
也可以用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察；用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测。
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